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试述特异性IgE测定的方法和原理。
参考答案和解析
特异性 IgE(specific IgE, sIgE)是指能与某种变应原特异性结合的 IgE。其测定方法通常可采用放射性 变应原免疫吸附试验(RAST)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和 CAP 变应原检测系统(CAP system) 。 RAST:将纯化的变应原吸附于固相载体上,加入待测血清及参考品,再与放射性核素 125I 标记的抗 IgE 抗体反应,最后测定固相的放射活性。放射强度越高,表示 sIgE含量越高。 ELISA:测定原理与步骤与 RAST相同,只是将放射性核素标记的抗 IgE改为酶标记抗 IgE,再加入底物, 利用酶催化底物显色来判断结果。 CAP system:是根据 RAST原理设计的全自动检测血清sIgE的荧光固相免疫检测系统。检测时在吸附有变 应原的载体 CAP 上,先加入待测血清和不同浓度的 IgE标准品,经一定时间温育和冲洗,加入 β半乳糖苷 酶标记的抗人 IgE,使之与固定在 CAP 上的 IgE结合。此酶作用于随后加入的底物 4甲基伞形酮β半乳糖 苷,使之产生荧光,用荧光光度计读取吸光值。荧光强度与 sIgE呈线形关系。sIgE的测定对 I型超敏反应疾病的诊断有重要价值,也是体外检测变应原的重要手段。
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