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科学家为了研究一种蜂鸟β-球蛋白基因的功能,将该基因导人到大肠杆菌(菌落为白色)细胞进行复制和表达,如下图。所使用的质粒中有和lacZ两种标记基因,前者让受体细胞具有抗氨苄青霉素的能力,后者表达的半乳糖苷酶会使一种被称为X-gal的物质呈现蓝色。
(1)将蜂鸟的B-球蛋白基因导人大肠杆菌,需要先用______(相同/不同)的限制性内切酶处理蜂鸟的DNA和载体质粒,在用________酶进一步处理以得到重组质粒。(6分)
(2)在将重组质粒导人大肠杆菌细胞之前,需要用_______(填物质名称)处理大肠杆菌,使之转化为能够吸收周围环境中DNA分子的__________细胞。(6分)
(3)使用添加了氨苄青霉素和X-gal的培养基培养经上述处理的大肠杆菌,选择________的菌落培养,就获得了导人重组质粒的大肠杆菌。(3分)
(1)将蜂鸟的B-球蛋白基因导人大肠杆菌,需要先用______(相同/不同)的限制性内切酶处理蜂鸟的DNA和载体质粒,在用________酶进一步处理以得到重组质粒。(6分)
(2)在将重组质粒导人大肠杆菌细胞之前,需要用_______(填物质名称)处理大肠杆菌,使之转化为能够吸收周围环境中DNA分子的__________细胞。(6分)
(3)使用添加了氨苄青霉素和X-gal的培养基培养经上述处理的大肠杆菌,选择________的菌落培养,就获得了导人重组质粒的大肠杆菌。(3分)
参考答案
参考解析
解析:(1)将蜂鸟的β-球蛋白基因导入大肠杆菌前,需先构建基因表达载体,即先用同种限制酶处理蜂鸟的DNA和质粒,并用DNA连接酶酶进一步处理以期得到重组质粒;
(2)将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法,即用Ca2+处理微生物细胞,使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态。
(3)质粒中有ampⅡ和lacZ两种标记基因,前者让受体细胞具有抗氨苄青霉素的能力,后者表达的半乳糖苷酶会使一种被称为X-gal的物质呈现蓝色。在构建基因表达载体时,ampⅡ基因完好,而lacZ基因被破坏,因此使用添加了氨苄青霉素和X-gal的培养基培养经上述处理的大肠杆菌,选择白色的菌落克隆培养,就获得了导入重组质粒的大肠杆菌。
(2)将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法,即用Ca2+处理微生物细胞,使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态。
(3)质粒中有ampⅡ和lacZ两种标记基因,前者让受体细胞具有抗氨苄青霉素的能力,后者表达的半乳糖苷酶会使一种被称为X-gal的物质呈现蓝色。在构建基因表达载体时,ampⅡ基因完好,而lacZ基因被破坏,因此使用添加了氨苄青霉素和X-gal的培养基培养经上述处理的大肠杆菌,选择白色的菌落克隆培养,就获得了导入重组质粒的大肠杆菌。
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Mesdlson和Stahl在1958年利用15N标记大肠杆菌DNA的实验证明的是哪一种机制( )A.DNA的半保留复制机制B.DNA的全保留复制机制C.DNA基因可转录为mRNAD.DNA基因可表达为蛋白质E.DNA能被复制
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考题
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(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:
(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。
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D.人甲状腺细胞生长激素基因处于关闭状态
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下列有关基因表达的叙述中,正确的是()A、哺乳动物红细胞中的基因不能表达B、大肠杆菌质粒基因表达与核糖体无关C、人的囊性纤维病是异常基因表达的结果D、洋葱根尖细胞基因表达场所包括线粒体、叶绿体
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对人类糖尿病的基因治疗研究大致步骤如下,由此可知() ①提取目的基因 ②将目的基因与质粒结合为重组质粒 ③将重组质粒导入大肠杆菌 ④重组质粒在菌体内增殖 ⑤分离重组质粒,提取目的基因 ⑥将目的基因与某种病毒结合为重组DNA ⑦将重组DNA导入人体有基因缺陷的细胞 ⑧目的基因的检测和表达A、过程①目的基因应来自患者本人B、过程④是为了修饰基因C、过程②、⑥在细胞内进行D、目的基因导入不同受体细胞目的不同
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作为基因的运输工具——运载体,必须具备的条件之一及理由是()A、对受体细胞无伤害,以便于重组DNA的鉴定和选择B、具有多个限制酶切点,以便于目的基因的表达C、具有某些标记基因,以使目的基因能够与其结合D、能够在受体细胞中稳定地保存下来并大量复制,以便提供大量的目的基因
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研究人员想将生长激素基因通过质粒介导进入大肠杆菌细胞内,以表达产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因:A是抗链霉素基因,B是抗氨苄青霉素基因,且目的基因不插入到基因A、B中,而大肠杆菌不带有任何抗性基因。则筛选获得“工程菌”的培养基中的抗生素首先应该()A、仅有链霉素B、仅有抗氨苄青霉素C、同时含链霉素和氨苄青霉素D、无链霉素和氨苄青霉素
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我国上海研究所合成一种具有镇痛作用而又不会使病人上瘾的药物——脑啡呔多糖(类似人类中的糖蛋白)。如要采用基因工程和发酵技术让微生物来生产脑啡呔多糖,应选哪种微生物为受体细胞()A、大肠杆菌B、大肠杆菌质粒C、T4噬菌体D、酵母菌
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能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制,以便提供大量的目的基因B
具有多个限制酶切点,以便于目的基因的表达C
具有某些标记基因,以便为目的基因的表达提供条件D
能够在宿主细胞中复制并稳定保存,以便于进行筛选
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