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试述PCR技术的反应过程
参考答案和解析
(1)引物的长度一般15~30bp; (2)引物扩增跨度:以500bp为宜,特定重要条件下可扩增长至10kb的片段; (3)引物碱基:G+C含量以40%~60%为宜,A、T、G、C最好随机分布,避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列; (4)避免引物内部出现二级结构:避免两条引物间互补,特别是3′端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异性的扩增条物; (5)引物3′端的碱基必须与模板严格配对,而且尽量不要为A,最好选择T,因为3′端末位为T时错配几率大大降低; (6)产物有或能加上合适的酶切位点; (7)被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
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(3)为建设基因工程菌,可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包含多次循环,每次循环包括三步:____________ 。反应过程中打开模板DNA双链的方法是 ___________ 。
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关于聚合酶链反应(PCR)的叙述不正确的是( )。A、PCR方法需要特定的引物B、PCR技术是一种体外DNA扩增技术C、PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内DNA的复制D、PCR技术能够快速特异地扩增任何目的基因或DNAE、PCR技术需要在恒温环境进行
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下面关于多聚酶链式反应(PCR)的叙述正确的是()A、PCR过程中需要引物,是为了使DNA双链分开B、PCR的循环过程分为变性、复性和延伸三步C、PCR过程中DNA合成方向是3’到5’D、PCR过程中边解旋边复制
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关于聚合酶链反应(PCR)的叙述错误的是()A、PCR技术是一种体外DNA扩增技术B、PCR技术能够快速特异地扩增任何目的基,因或DNAC、PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内D、PCR方法需要特定的引物E、PCR技术需要在恒温环境进行
考题
问答题试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。
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