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试述提高克隆基因在原核细胞中表达效率途径有哪些?
参考答案和解析
(1)选择合适载体,提高翻译水平
强启动子——提高转录水平
核糖体结合位点(ATG-SD)距离合适
在基因重组过程中应将结构基因接于SD序列之后.以便为mRNA提供核糖体结合位点,提高真核基因表达效率。
避免产物降解:分泌/融合表达;(融合蛋白表达后再去除原核肽段)
(2)选择合适宿主(如Lac启动子——LacI菌;PL/PR——CI857溶源菌)
(3)调节宿主细胞代谢
为保持宿主正常生长速度及重组转化体稳定性,维持产物的高效表达,必需采用适当方法,调节细胞代谢。目前,调节细胞代谢方法很多。如营养物浓度控制、产物诱导表达、载体诱导复制及促进产物分泌等。
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