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酵母双杂交体系用于

A．哺乳动物功能基因的表型分析

B．研究功能基因的亚细胞定位

C．检测细胞核内发生互作的蛋白质

D．研究RNA聚合酶对转录的激活作用

参考答案和解析
C[考点]酵母双杂交体系的应用。酵母双杂交体系是上世纪90年代初发展起来的分离基因的新方法，可用于分离能与已知靶蛋白质相互作用的基因。基本原理：真核生物的转录因子大多是由两个结构上分开、功能上独立的结构域组成的。如GAL4的N端1-147个氨基酸是DNA结合域(BD)，其C端768-881氨基酸是转录激活域(AD)。一般情况下，AD能与GAL4效应基因启动子上游的特定DNA区段(UAS)相结合，而此时，AD则推动了转录起始。若用基因工程的方法，将GAL4的AD和BD分别克隆到不同的载体上，导入同一细胞株中表达，效应基因无法被激活，但可把来自不同转录因子的AD或BD区域连成一个功能基因。主要实验过程：(1)选择缺失GAL4编码基因的酵母寄主菌株-SFY526或HF7c；(2)构建带有GAL1 UAS-启动子-lac Z(His3)的转化载体；(3)把已知的靶蛋白质编码基因克隆到pGBT9的多克隆位点上，把所有cDNA都克隆到pGAD424载体上，构成cDNA表达文库。(4)从大肠杆菌中分别提取这两种重组质粒DNA，共转化感受态酿酒酵母菌株。(5)将共转化的酵母菌株涂布于缺少Leu，Trp和His的培养基上，筛选表达相互作用的杂种蛋白的阳性菌落。
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