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蓝白斑筛选标记基因实验中,蓝色斑表示是插入了外源片段重组质粒的菌落。
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考题
某一质粒载体如图6所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活
(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:
(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述三种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是____;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的,其原因是____。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有____的固体培养基。
(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自____。
考题
为了减轻工程菌的代谢负荷,提高外源基因的表达水平,可以采取的措施有()A、将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段。B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达。C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的复制。D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制
考题
载体质粒pBR325共有三个选择性标记:Apr、Tcr、Cmr。它们分别含有一个单一酶切位点:PstI、SphI和EcoRI。若将一外源基因取代此载体上不含Cmr标记基因的PstI-SphI限制性DNA片段,那么用于转化子和重组子筛选的试剂应是()A、ApB、TcC、CmD、Ap+TcE、Ap+Cm
考题
基因工程菌中重组质粒的丢失机制是()A、重组质粒渗透至细胞外B、重组质粒被细胞内核酸酶降解C、重组质粒在细胞分裂时不均匀分配D、重组质粒杀死受体细胞E、重组质粒刺激受体细胞提高其通透性
考题
外源基因表达的基本流程是()。 ①重组表达载体导入宿主细胞; ②目的基因的获得; ③重组表达载体的筛选与认; ④目的基因与载体的重组; ⑤目的基因的表达。A、②④①③⑤B、①②④③⑤C、②④③①⑤D、④②①③⑤
考题
单选题关于蓝白斑筛选,叙述错误的是()A
又称α-互补筛选B
含有重组质粒的细菌形成白色菌落C
含有重组质粒的细菌形成蓝色菌落D
带有“空”质粒的细菌形成蓝色菌落E
不含质粒的细菌不能生长
考题
单选题在进行蓝-白筛选时,pUC载体的lacZ基因位点插入外源DNA,转化细菌后,含有插入了外源DNA的重组质粒的()。A
细菌不能在含氨苄青霉素的培养板上生长B
细菌在含有X-gal和诱导剂IPTG的琼脂培养板上形成白色菌斑C
细菌在含有X-gal和诱导剂IPTG的琼脂培养板上形成蓝色菌斑D
细菌在含有X-gal和诱导剂IPTG的琼脂培养板上形成透明的无色菌斑E
无菌落形成
考题
单选题关于DNA克隆的叙述,不正确的是( )。A
目的基因的获取B
外源基因和载体连接C
将重组DNA导入受体菌D
筛选出含有目的基因的转化菌E
常用到DNA解链酶
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